尊龙凯时提供的人高转移性肝癌细胞MHCC97H/LUC培养指南旨在帮助科研人员更好地处理和培养该细胞系。以下是详细的细胞培养说明：

一、细胞培养条件

细胞名称：人高转移性肝癌细胞MHCC97H/LUC
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM+10%FBS+1%P
传代方法：建议在第一次传代时采用1:2比例，持续关注细胞状态，定期换液。

备注：建议用无菌离心管收集培养基，进行对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞适应良好后，应灌满完全培养液并封口，这样是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，首先用75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后放入超净台中进行严格的无菌操作。接着，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，再进行后续处理。观察细胞生长情况，并对其拍照，建议拍摄40x、100x、200x倍率各一张，前三天的照片将作为重要的售后依据，若未提供照片则视为细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，将培养液收集至离心管中，仅留5ml培养基，并放入37℃、5% CO2的孵箱培养。若细胞密度超过80%，可执行传代，具体操作步骤如下：

1. 弃去培养上清，并用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 向培养瓶中加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，即可迅速取回，轻敲培养瓶并加入5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，再将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶培养（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，置于37℃、5% CO2细胞培养箱中。

b. 细胞冻存

1. 待细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS洗涤细胞一次。
2. 向培养瓶中加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，经过显微镜观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，并轻轻吹打使细胞脱落，随后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。在后期转入液氮罐前，需要在-80℃冰箱中存放至少24小时。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，至管内无结晶后，用75%酒精擦拭管外表。
2. 将冻存管中的细胞转移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清，重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天，换用新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞贴壁不牢，可能会出现细胞脱落的情况，这属于正常现象。如脱落较多，可将培养瓶中的所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，以收集上清进行过渡培养（后期可用于对比培养），然后加入胰酶进行消化。

五、售后条款

对于细胞出现的问题，可重发的情况包括细胞运输时的各种意外、细胞污染等。请在收到产品后48小时内如实反馈实验结果以便验证。清晰的照片及详细操作信息将有助于确认责任。

如有任何疑问或需进一步指导，欢迎联系尊龙凯时，我们始终致力于为您提供优质的服务和支持。