尊龙凯时人胃癌细胞MGC803培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人胃癌细胞MGC803
生长特性：细胞需贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基+10% FBS+1% P
传代方法：首次建议按1:2比例传代，每两天更换培养基。

二、细胞接收后的处理

将细胞培养至良好状态后，请用完整的培养基灌满细胞瓶并封好瓶口，以确保运输细胞的状态良好。收到细胞后，请用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，并在超净工作台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行后续处理。通过显微镜观察细胞的生长情况，并拍照保存不同倍数的图像（建议拍摄40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据。如未提供照片，将默认状态良好。

在传代时，建议一瓶使用原装的完全培养基，另一瓶使用自配的培养基，以便比较效果。换液后需将瓶盖松开。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞的汇合度未超过80%，将培养瓶中的完全培养液转移至离心管中，保留5mL完全培养基，继续37℃、5% CO2孵育。如果细胞密度超过80%，可以进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2 mL 0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，监测细胞状态，如果细胞圆形并脱落，迅速返回操作台，轻敲培养瓶后加入5 mL以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，吸出培养液，并转移至15 mL离心管中，在1000 RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2 mL完全培养基重悬。
4. 按1:2比例将细胞悬液分瓶（两个T25瓶），补充5-8 mL的新完全培养基，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

当细胞覆盖培养瓶80%时，请弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS洗涤细胞一次。

1. 加入约1 mL 0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞状态，待细胞回缩变圆后加入5 mL完全培养基终止消化，吹打细胞使其脱落，转移至15 mL离心管中，1000 RPM离心5分钟。
2. 弃去上清，加入1 mL无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
3. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如后期需转入液氮罐中，需至少在-80℃冰箱中存放24小时后再转入液氮罐中。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管内无冰晶，随后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5 mL完全培养基的15 mL离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5 mL完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中进行培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

请注意，有些细胞贴壁不牢，在运输过程中可能会出现细胞脱落的现象，这是正常的。如发现细胞脱落较多，可将瓶内液体收集至离心管，离心后进行培养。此外，若需处理脱落细胞，可加入胰酶，轻轻操作后终止消化并重悬。请在操作后按1:2比例分瓶传代，并补充新培养基。

五、售后条款

1）细胞出现问题时，重发的条件包括：
1.1 运输过程中细胞丢失、瓶破、培养液漏液等情况；
1.2 收到产品48小时内报告的污染问题（需提供实验结果）；
1.3 常温和干冰配送细胞复苏后的存活率低于标准（需提供照片）；
1.4 细胞在固定时间未开封出现污染；
1.5 细胞活力问题需在7天内检测并报告；
1.6 收到细胞后第三天请拍照，未通知视为产品合格。
2）不予重发的情况包括：
2.1 客户造成的污染；
2.2 客户操作不当导致的细胞状态差；
2.3 使用非推荐培养体系导致的问题；
2.4 未提供收货前三天照片的问题；
2.5 在培养中有不当处理的情况；
2.6 收到后未及时告知的情况；
2.7 而其他特殊情况将另行商议处理。

选择尊龙凯时，为您的细胞实验提供最优质的支持！