## 大鼠成纤维样滑膜细胞FLS培养指南

### 一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠成纤维样滑膜细胞FLS

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM+10%FBS+1%双抗

传代方法：建议第一次1:2传代，2天后更换培养液

备注：使用无菌离心管收集培养基以作对比，若对比效果不良，建议直接选购尊龙凯时的完全培养基。

### 二、细胞处理步骤

收到细胞后，待培养至良好状态时，应将其灌满完全培养液并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，用75%酒精喷洒瓶身进行消毒，随后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO₂培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。通过显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（推荐40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为重要售后依据。如未提供照片，则默认收到的状态良好。

在传代后，建议将一瓶用原瓶的完全培养基，另一瓶用自配的完全培养基进行对比培养。换液后，请适度松动盖子。

### 三、细胞培养步骤

a、细胞传代：

当细胞未超过80%汇合度时，将原有完全培养液收集至离心管中，并留5ml以便后续培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙和镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞变化情况；若细胞大部分变圆并脱落，迅速在操作台轻敲瓶底并加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，再放入37℃、5% CO₂细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶约1ml，观察细胞回缩并变圆后，加入5ml完全培养基终止消化并轻轻吹打，待细胞脱落后转移至15ml离心管，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀并转入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱存放24小时后再移入。

c、细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴解冻至无结晶，然后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管内细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清液，将细胞用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO₂细胞培养箱中培养。
4. 第二天，更换新鲜的完全培养基继续培养。

### 四、注意事项

某些细胞在运输过程中可能会发生脱落，这属于正常现象。如脱落程度较大，可采用以下方法：将培养瓶中的所有培养液收集于离心管，进行1000rpm离心5分钟，收集上清用于过渡培养，沉淀后添加1-2ml胰酶轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，再次离心并重悬后按1:2比例分瓶传代，将新的完全培养基补充至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO₂培养箱中培养。

### 五、售后条款

1）细胞问题的重发条件：

1. 细胞在运输过程中出现丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等问题，予以重发。
2. 如发生污染，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后重发。
3. 常温发货的细胞如静置24小时后，干冰冻存的细胞复苏后24小时内大多数未存活，需提供真实清晰的状态照片，重发。
4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时未开封且出现污染，则重发。
5. 细胞活性问题须在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法检测细胞活力，经核实后予重发。
6. 收到细胞当天以及第2、3天请拍照，3天内未告知视为产品合格。若4-7天内问题需提供前三天照片及相关操作步骤，由技术人员判断责任，判断我方责任重发，由双方协商处理或按合同价的50%收费重发。

2）不予重发的情况：

1. 客户造成污染，恕不重发。
2. 不正确操作导致细胞状态不良，恕不重发。
3. 非推荐培养体系造成细胞状态不佳，恕不重发。
4. 细胞状态不佳但未提供培养前3天照片，恕不重发。
5. 细胞培养过程中经过其他处理，恕不重发。
6. 收到细胞后2天内未告知问题，恕不重发。
7. 具体情况将另行决定。

在探索大鼠成纤维样滑膜细胞FLS的科研过程中，使用尊龙凯时的优质产品将为您的研究提供更有力的支持。